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Le microscope laser à deux photons in vivo présente de multiples avantages techniques essentiels. Tout d’abord, le laser femtoseconde accordable de 800 nm à 1040 nm peut correspondre aux longueurs d’onde d’excitation de la plupart des colorants fluorescents courants, permettant le marquage spécifique et l’imagerie de différentes structures biologiques sans interférence croisée. L’énergie du laser est concentrée dans un petit volume focal, réduisant le photoblanchiment et les photodommages sur les échantillons vivants, permettant une observation en temps réel à long terme des processus biologiques vivants. Le détecteur à tube multiplyeur de photoélectrons à arseniate de gallium présente une haute sensibilité aux signaux de fluorescence faibles, améliorant le rapport signal sur bruit des résultats d’imagerie. La vitesse de balayage de 30 images par seconde à une résolution de 512×512 permet de capter en temps réel des processus biologiques dynamiques tels que l’inactivation des neurones et la migration cellulaire. La platine de balayage motorisée XYZ permet un balayage automatique de l’échantillon et une reconstruction 3D, tandis que le système de refroidissement à eau assure un fonctionnement stable à long terme des lasers à haute puissance. Le logiciel professionnel d’analyse d’imagerie en direct 3D prend en charge des fonctions telles que la quantification des signaux calciques, le suivi des trajectoires des neurones et le rendu de volume 3D, réduisant considérablement la charge de travail des chercheurs lors de l’analyse post-traitement.
Les paramètres techniques de ce microscope laser à deux photons in vivo sont les suivants : La source laser est un laser femtoseconde accordable de 800 nm à 1040 nm, avec une puissance de sortie maximale de 3 W. La plage de grossissement est de 10x à 60x, avec une résolution d’imagerie latérale de 0,3 μm et une profondeur d’imagerie allant jusqu’à 1 mm dans les tissus biologiques. Le détecteur utilise des tubes multiplyeurs de photoélectrons à arseniate de gallium, avec une efficacité quantique allant jusqu’à 45 % à la longueur d’onde de 500 nm. La vitesse de balayage est de 30 images par seconde à une résolution de 512×512, avec une résolution de balayage maximale de 2048×2048. La platine de balayage motorisée XYZ a une course de 100×100×50 mm, avec une précision de positionnement de ±0,1 μm. L’appareil est équipé d’un logiciel professionnel d’analyse d’imagerie en direct 3D, prenant en charge l’analyse des signaux calciques, le suivi des neurones, la reconstruction 3D et d’autres fonctions. Le système de refroidissement utilise un design à refroidissement à eau, avec une puissance de refroidissement de 500 W. L’alimentation électrique est de 220 V 50/60 Hz, avec une puissance nominale de 1,5 kW. L’ensemble de l’appareil a des dimensions de 120×80×150 cm et un poids net de 320 kg, et est équipé d’un tableau de stockage RAID externe de 4 To pour le stockage de données à grande capacité. La classe de sécurité laser est de classe 4, nécessitant un équipement de protection dédié et une salle d’exploitation spéciale pour une utilisation en sécurité.
Ce microscope laser à deux photons in vivo est largement utilisé dans les domaines de recherche en sciences du vivant de pointe. En neurosciences, il permet de réaliser une imagerie en temps réel de l’activité neuronale du cerveau de souris vivantes, en capturant le processus d’inactivation des neurones individuels et l’interaction entre les circuits neuronaux, fournissant des données clés pour l’étude de la fonction cérébrale et des maladies neurologiques. En biologie cellulaire, il permet d’observer les processus dynamiques de la prolifération, de la migration et de l’apoptose des cellules vivantes, soutenant la recherche sur la transduction des signaux cellulaires et les mécanismes d’action des médicaments. En pharmacologie, il permet un suivi en temps réel de l’efficacité des médicaments dans les organismes vivants, tels que la distribution et le processus métabolique des médicaments anti-tumoraux dans les tissus tumoraux. En biologie végétale, il permet d’observer la structure microscopique des tissus végétaux vivants, tels que le flux de la sève cellulaire et la croissance des racines des plantes. De plus, il peut également être utilisé dans les domaines de la biologie du développement et de l’immunologie, fournissant un outil puissant pour l’observation en temps réel in vivo des processus biologiques.